بهینه کردن شرایط تخمیر غیرپیوسته (batch) و غیرپیوسته خوراک دهی شده (fed-batch) برای تولید پروتئین پروکیموزین نوترکیب در باکتری اشرشیا کلای
پایان نامه
- وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه شیراز - دانشکده کشاورزی
- نویسنده سید حسیین اسدی یوسف آباد
- استاد راهنما مهرداد نیاکوثری محمدهادی اسکندری ارسلان حسینی نوحدانی امیر مقصودی
- سال انتشار 1393
چکیده
در این مطالعه، کشت سلولی با تراکم سلولی بالای باکتری e. coli نوترکیب تولید کننده آنزیم پروکیموزین به منظور افزایش تولید آنزیم پروکیموزین بررسی شد. برای افزایش تراکم سلولی از روش کشت غیرمداوم خوراک دهی شده با خوراک دهی نمایی استفاده شد. در ابتدا بهینه سازی محیط کشت در فلاسک انجام شد و چهار محیط کشت که به ترتیب میزان توده سلولی در آن ها 765/0، 614/0، 875/0و 908/0 گرم بر لیتر بود، انتخاب و در مرحله کشت غیرمداوم مورد استفاده قرار گرفتد. محیط کشت شماره 20 با میزان توده سلولی 75/3 گرم بر لیتر به عنوان بهترین محیط کشت انتخاب شد. روش سطح پاسخ جهت بهینه سازی استفاده شد. سرعت های رشد ویژه بین 2/0 و 3/0 بر ساعت و زمان های القاء نیز بین 6 و 10 ساعت پس از شروع خوراک دهی به عنوان ورودی های نرم افزار تنظیم شدند و 11 آزمایش توسط نرم افزار design expert جهت بهینه کردن حداکثر تولید توده سلولی، پروتئین کل و پروکیموزین طراحی شدند. سرعت های رشد ویژه 25/0 و 20/0 بر ساعت و زمان های القای 10 و 8 ساعت به ترتیب دارای بیشترین و کمترین میزان توده سلولی بود. همچنین با افزایش زمان القاء از 7 تا 9 ساعت و 24 دقیقه، توده سلولی افزایش و هرچه مدت زمان شروع القاء به شروع فرایند خوراک دهی نزدیک تر بود، میزان توده سلولی نهایی بیشتر کاهش یافت. افزایش سرعت رشد ویژه تا حدود 26/0 موجب افزایش توده سلولی و افزایش بیشتر از این مقدار باعث کاهش توده سلولی شد. سرعت های رشد ویژه 25/0 و 2/0 بر ساعت با زمان القای 8 ساعت به ترتیب بیشترین و کمترین میزان پروتئین کل را دارا بودند. افزایش سرعت رشد ویژه تا حدود 25/0 بر ساعت باعث افزایش پروتئین کل و افزایش بیشتر آن یک روند کاهشی در میزان پروتئین کل ایجاد می کند. سرعت رشد ویژه 25/0 بر ساعت با زمان های القای 6 و 10 ساعت به ترتیب بیشترین و کمترین میزان پروتئین پروکیموزین را دارا بودند. با افزایش زمان القاء از 6 ساعت و 35 دقیقه تا 9 ساعت و 24 دقیقه، میزان پروتئین پروکیموزین به طور معنی داری کاهش و با افزایش سرعت رشد ویژه از 21/0 تا حدود 25/0 بر ساعت، پروکیموزین به طور معنی داری افزایش یافت. سرعت رشد و زمان القاء بهینه پیش بینی شده توسط نرم افزار جهت تولید حداکثر مقدار پروتئین پروکیموزین به ترتیب 25/0 بر ساعت و 6 ساعت و 35 دقیقه بود که در این حالت میزان بیان پروتئین پروکیموزین برابر 503/0 گرم بر لیتر بود.
منابع مشابه
بهینه سازی شرایط کشت باکتری اشرشیا کولی برای اصلاح تولید قطعه C-D نوترکیب باکتریورودوپسین
در بررسی حاضر، بخش CDاز پروتئین باکتریورودوپسین (BR) در اشرشیاکولی نوترکیب بیان شد. ژن موتانت BRبا در نظر گرفتن کدون مورد استفاده در اشرشیاکولی ساخته شد. ژن ساخته شده در پلاسمید بیانی pET21a+ در محل های برش Nde I وHind III کلون شده و تحت کنترل پیشبر T7</em...
متن کاملبهینه سازی شرایط کشت باکتری اشرشیا کولی برای اصلاح تولید قطعه c-d نوترکیب باکتریورودوپسین
در بررسی حاضر، بخش cdاز پروتئین باکتریورودوپسین (br) در اشرشیاکولی نوترکیب بیان شد. ژن موتانت brبا در نظر گرفتن کدون مورد استفاده در اشرشیاکولی ساخته شد. ژن ساخته شده در پلاسمید بیانی pet21a+ در محل های برش nde i وhind iii کلون شده و تحت کنترل پیشبر t7 با موفقیت بیان شد. پروتئین بیان شده با sds page تجزیه شد. اثر دما (a)، زمان القا (b)و زمان فرایند پس از القا (c) روی بازده ی میزان بیان پروتئی...
متن کاملمقایسه کمی تولید پروتئین نوترکیب انتهای کربوکسیل نوروتوکسین بوتولینوم a در کشت های ناپیوسته و ناپیوسته خوراک دهی شده باکتری اشرشیا کلی
سابقه و هدف: پروتئین 50 کیلو دالتونی واقع در انتهای کربوکسیل زنجیره سنگین نوروتوکسین کلستریدیوم بوتولینوم تیپ a (bont/a-hc) امروزه برای تولید واکسن نوترکیب علیه بوتولیسم به کار می رود. هدف از این پژوهش بررسی تولید این پروتئین نوترکیب در باکتری اشرشیا کلی در کشت های با تراکم سلولی بالا (ناپیوسته خوراک دهی شده) و مقایسه تولید آن با کشت های ناپیوسته بود. مواد و روش ها: در این مطالعه، رشد باکتری اش...
متن کاملSelf-Organizing Modelling of Biotechnological Batch and Fed-Batch Fermentations
The paper at hand deals with an approach for the automatic generation of dynamic nonlinear process models. These models are obtained from experimental process data as well as from theoretical biological and chemical reeections using the ideas of Genetic Programming for the supervision and coordination of the symbolic model structure during the automatic development.
متن کاملBatch-to-Batch Iterative Learning Control of a Fed-batch Fermentation Process Using Incrementally Updated Models
Batch-to-batch iterative learning control of a fed-batch fermentation process using batchwise linearised models identified from process operation data is presented in this paper. Due to model-plant mismatches and the present of unknown disturbances, off-line calculated control policy may not be optimal when implemented to the real process. The repetitive nature of batch process allows informati...
متن کاملComparison between batch and fed-batch production of rhamnolipid by Pseudomonas aeruginosa
This paper presents a comparison between batch and three different sets of fed batch fermentations forrhamnolipid production by Pseudomonas aeruginosa. The batch run was performed with 500 ml of culturemedium having the initial glycerol and sodium nitrate concentrations of 30 and 8.3 g/l, respectively. For a fedbatch run with nitrogen source in feed, 250 ml of the nitrogen exc...
متن کاملمنابع من
با ذخیره ی این منبع در منابع من، دسترسی به آن را برای استفاده های بعدی آسان تر کنید
ذخیره در منابع من قبلا به منابع من ذحیره شده{@ msg_add @}
نوع سند: پایان نامه
وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه شیراز - دانشکده کشاورزی
میزبانی شده توسط پلتفرم ابری doprax.com
copyright © 2015-2023